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Kits de ensayo basados en células – Fagocitosis – con sustrato de glóbulos rojos

La fagocitosis por fagocitos (como los macrófagos, las células dendríticas y los neutrófilos) es esencial para una variedad de eventos biológicos, incluyendo la remodelación de tejidos y la continua limpieza de las células moribundas, pero también la inmunidad.
La fagocitosis puede medirse in vitro midiendo la absorción de un sustrato por las células fagocíticas. Se pueden utilizar varios sustratos, como los glóbulos rojos, las partículas de E. coli y Zymosan (levadura).
Los eritrocitos (glóbulos rojos) se utilizan comúnmente en las pruebas de fagocitosis. Para la fagocitosis mediada por FcR, los eritrocitos son primero opsonizados con suero o IgG antes de ser añadidos a los fagocitos. Tras la eliminación de los eritrocitos no fagocíticos, los glóbulos rojos engullidos por las células fagocíticas se cuentan manualmente (expresados como índice fagocítico o eritrocitos engullidos por fagocitos). Este método de recuento manual es muy engorroso, requiere mucho tiempo y es difícil cuando se trata de analizar un gran número de muestras.
Los kits de ensayo de fagocitosis no requieren el recuento manual de los eritrocitos. En su lugar, las células son lisadas y detectadas por un lector de placas.

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Qué son los Eosinófilos

Los Eosinófilos

Los granulocitos eosinófilos, generalmente llamados eosinófilos (o, menos comúnmente, acidófilos), son glóbulos blancos que son uno de los componentes del sistema inmunológico responsables de combatir las infecciones y los parásitos en los vertebrados. Junto con los mastocitos, también controlan los mecanismos asociados con la alergia y el asma. Son granulocitos que se desarrollan durante la hematopoyesis en la médula ósea antes de migrar a la sangre.
Estas células son eosinófilas o «amantes del ácido»: Normalmente transparentes, aparecen de color rojo ladrillo después de teñirlas con eosina, un colorante, usando el método Romanowsky. La tinción se concentra en pequeños gránulos dentro del citoplasma celular, que contienen muchos mediadores químicos, como la histamina y proteínas como la eosinófila peroxidasa, la ribonucleasa (RNasa), desoxirribonucleasas, lipasa, plasminógeno y la principal proteína básica. Estos mediadores se liberan mediante un proceso llamado degranulación tras la activación del eosinófilo, y son tóxicos tanto para los tejidos del parásito como para los del huésped.

En los individuos normales, los eosinófilos constituyen alrededor del 1-6% de los glóbulos blancos, y tienen un tamaño de unos 12-17 micrómetros. Se encuentran en la médula y en la unión entre la corteza y la médula del timo, y, en el tracto gastrointestinal inferior, en el ovario, útero, bazo y ganglios linfáticos, pero no en el pulmón, la piel, el esófago o algunos otros órganos internos en condiciones normales. La presencia de eosinófilos en estos últimos órganos está asociada a la enfermedad. Los eosinófilos persisten en la circulación durante 8-12 horas, y pueden sobrevivir en el tejido durante 8-12 días más en ausencia de estimulación.

Desarrollo, migración y activación de los eosinófilos:

Los eosinófilos se desarrollan y maduran en la médula ósea.
Se diferencian de las células precursoras mieloides en respuesta a las citoquinas interleucina 3 (IL-3), interleucina 5 (IL-5) y el factor estimulante de colonias de granulocitos macrófagos (GM-CSF). Los eosinófilos producen y almacenan muchas proteínas granulares secundarias antes de su salida de la médula ósea. Después de la maduración, los eosinófilos circulan en la sangre y migran a los sitios inflamatorios en los tejidos, o a los sitios de infección por helmintos en respuesta a quimiocinas como la CCL11 (eotaxina-1), CCL24 (eotaxina-2), CCL5 (RANTES), y ciertos leucotrienos como el leucotrieno B4 (LTB4). En estos sitios infecciosos, los eosinófilos son activados por las citoquinas de tipo 2 liberadas por un subconjunto específico de células T ayudantes (Th2); la IL-5, la GM-CSF y la IL-3 son importantes para la activación de los eosinófilos así como para su maduración.

Funciones de los eosinófilos

Tras la activación, las funciones del efector de los eosinófilos incluyen la producción de :
proteínas granulares catiónicas y su liberación por degranulación.
especies reactivas de oxígeno como el superóxido
mediadores lipídicos como los eicosanoides de las familias de los leucotrienos (p. ej., LTC4, LTD4, LTE4) y las prostaglandinas (p. ej., PGE2).
enzimas, como la elastasa.
factores de crecimiento como el TGF beta, VEGF y PDGF.
Citocinas como IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-13 y TNF alfa.
Además, los eosinófilos desempeñan un papel en la lucha contra las infecciones virales, lo que se pone de manifiesto por la abundancia de ARN que contienen en sus gránulos, y en la eliminación de fibrina durante la inflamación. Los eosinófilos, junto con los basófilos y los mastocitos, son importantes mediadores de las respuestas alérgicas y de la patogénesis del asma y están asociados con la gravedad de la enfermedad. También combaten la colonización por helmintos (gusanos) y pueden estar ligeramente elevados en presencia de ciertos parásitos. Los eosinófilos también participan en muchos otros procesos biológicos, como el desarrollo de la glándula mamaria pospuberal, el ciclo del celo, el rechazo de aloinjertos y la neoplasia. También se han visto implicados recientemente en la presentación de antígenos a las células T.

Proteínas de gránulos eosinófilos :

Tras la activación por un estímulo inmunológico, los eosinófilos se degeneran para liberar una serie de proteínas catiónicas granulares citotóxicas que son capaces de inducir daños y disfunciones tisulares. Estas incluyen:

  • Proteína básica mayor (PBS)
  • Proteína catiónica eosinófila (ECP)
  • Eosinófilo peroxidasa (EPO)
  • Neurotoxina derivada de los eosinófilos (EDN)

La principal proteína básica, la eosinófila peroxidasa y la proteína catiónica eosinófila son tóxicas para muchos tejidos. La proteína catiónica eosinófila y la neurotoxina derivada de los eosinófilos son ribonucleasas con actividad antiviral. La proteína básica principal induce la degranulación de los mastocitos y los basófilos, y está implicada en la remodelación de los nervios periféricos. La proteína catiónica eosinófila crea poros tóxicos en las membranas de las células diana permitiendo la entrada potencial de otras moléculas citotóxicas en la célula, puede inhibir la proliferación de células T, suprimir la producción de anticuerpos por parte de las células B, inducir la degranulación por parte de los mastocitos y estimular a los fibroblastos para que secreten moco y glicosaminoglicanos.

La eosinófila peroxidasa forma especies reactivas de oxígeno e intermediarios de nitrógeno reactivos que promueven el estrés oxidativo en el blanco, causando la muerte celular por apoptosis y necrosis.

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Qué son los Basofilos

Los Basófilos y su importancia en nuestro cuerpo

Los basófilos son los menos comunes de los granulocitos, representando alrededor del 0,01% al 0,3% de los leucocitos (glóbulos blancos) circulantes.
El nombre proviene del misterio de que estos leucocitos son basófilos, es decir, que son susceptibles de ser teñidos por los tintes de base, como se muestra en la imagen.

Los basófilos contienen grandes gránulos citoplasmáticos que oscurecen el núcleo de la célula bajo el microscopio. Sin embargo, cuando no se tiñe, el núcleo es visible y suele tener 2 lóbulos. El mastocito, una célula en los tejidos, tiene muchas características similares. Por ejemplo, ambos tipos de células almacenan histamina, una sustancia química que es secretada por las células cuando son estimuladas de ciertas maneras (la histamina causa algunos de los síntomas de una reacción alérgica). Como todos los granulocitos circulantes, los basófilos pueden ser reclutados en un tejido a partir de la sangre cuando sea necesario.

Funciones de los basófilos

Los basófilos aparecen en muchos tipos específicos de reacciones inflamatorias, particularmente en aquellas que causan síntomas alérgicos. Los basófilos contienen heparina anticoagulante, que evita que la sangre se coagule demasiado rápido. También contienen el vasodilatador histamina, que promueve el flujo de sangre a los tejidos. Se pueden encontrar en cantidades inusualmente altas en los lugares de infección exoparásita, por ejemplo, en las garrapatas. También aparecen en tejidos donde se producen reacciones alérgicas y probablemente contribuyen a la gravedad de estas reacciones. Los basófilos tienen receptores de proteínas en su superficie celular que se unen al anticuerpo IgE muy fuertemente. Es el anticuerpo IgE unido el que confiere una respuesta selectiva de estas células a las sustancias del entorno, por ejemplo, las proteínas del polen. Estudios recientes en ratones sugieren que los basófilos también pueden regular el comportamiento de las células T y mediar la magnitud de la respuesta inmune secundaria.

Secreciones de los basofilos

Cuando se activan, los basófilos se degeneran para liberar histamina, proteoglicanos (por ejemplo, heparina y condroitina) y enzimas proteolíticas (por ejemplo, elastasa y lisofosfolipasa). También secretan mediadores lipídicos como los leucotrienos y varias citoquinas. La histamina y los proteoglicanos se almacenan previamente en los gránulos de la célula, mientras que las demás sustancias secretadas son de nueva generación. Cada una de estas sustancias contribuye a la inflamación. Evidencias recientes sugieren que los basófilos son una fuente importante de la citoquina, la interleucina-4, quizás más importante que las células T. La interleucina-4 es considerada una de las citoquinas críticas en el desarrollo de alergias y la producción de anticuerpos IgE por el sistema inmunológico. Hay otras sustancias que pueden activar a los basófilos para que segreguen, lo que sugiere que estas células tienen otros papeles en la inflamación.

La basopenia (un bajo recuento de basófilos) es difícil de demostrar ya que el recuento normal de basófilos es tan bajo; se ha informado de ella en asociación con la urticaria autoinmune (una afección de picor crónico). La basofilia también es poco común pero puede verse en algunas formas de leucemia o linfoma.

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